BAKTERIOLOGI

pergerakan bakteri menggunakan preparat basah dengan metode tetes tegak

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Sejarah Mikrobiologi

      Mikrobiologi ialah ilmu pengetahuan tentang perikehidupm mahluk-mahluk kecil yang hanya kelihatan dengan mikroskop (bahasa Yunani: mikros = kecil, bios = hidup, logos = kata atau ilmu). Mahluk-mahluk kecil itu disebut mikroorganisme, rnikroba, protista atau jasad renik (Dwijoseputro, 2005).

      Antony van Leeuwenhoek (1632--1723) ialah orang yang pertama kali mengetahui adanya dunia mikroorganisme itu. Dengan mikroskop ciptaannya ia dapat melihat bentuk mahluk - mahluk kecil yang sebelumnya itu tidak diduga sama sekali keadaannya, mikroskop buatan Leeuwenhoek itu memberikan pembesaran sampai 300 kali. Dari air hujan yang menggenang di kubangan - kubangan dan dari air jambangan bunga ia peroleh beraneka hewan bersel satu yang olehnya diberi nama Infusoria atau “hewan tuangan" (Dwijoseputro, 2005).

      Antara 1674 sampai 1683 ia terus-menerus mengadakan hubungan dengan lembaga "Roval Society" di Inggris. Ia melaporkan hal-hal yang diamatinya dengan mikroskop itu kepada lembaga tersebut. Laporan-laporan itu disertai dengan gambar-gambar mikroorganisme yang beraneka ragam. Di dalam sejarah mikrobiologi, Leeuwenhoek dapat dipandang sebagai peletak batu pertamanya (Dwijoseputro, 2005).

2.2 Hubungan Mikroorganisme Asli Dengan Manusia

      Pada umumnya mikroorganisme asli yang berada didalam tubuh manusia adalah bersifat komensalisme. Mereka memanfaatkan hubungan .dengan inangnya yaitu manusia tetapi inangnya tidak terpengaruh. Mikroba komensal ini memperoleh makanannya dari sekresi dan produk-produk buangan tubuh manusia (Umi, 2009).

        Ada beberapa jenis mikroorganisme asli yang mempunyai hubungan mutualisme dengan manusia sebagai inangnya yaitu mereka memanfaatkan inangnya dan hidup bersama-sama. Keuntungan bagi manusia sebagai inangnya di dalam hubungan mutualisme tersebut antara lain sebagai berikut.

-          Banyak bakteri usus yang dapat mensintesis vitamin-vitamin B, vitamin E, dan vitamin K Vitamin yang dihasilkan mempunyai peranan dalam memenuhi persyaratan vitamin pada manusia.

-          Mikroorganisme asli ada yang cenderung meniadakan mikroorganisme patogen sehingga dapat berfungsi melindungi manusia terhadap penyakit Peniadaan tersebut kemungkinan disebabkan oleh persaingan akan nutrisi atau karena dihasilkan substansi yang menghambat mikroba Patogen tersebut ( Umi, 2009).

2.3 Mikroskop

      Salah satu alat untuk melihat sel mikroorganisme adalah mikroskop cahaya. Dengan mikroskop kita dapat mengamati sel bakteri yang tidak dapat dilihat dengan mata telanjang. Pada umumnya mata tidak mampu membedakan benda dengan diameter lebih kecil dari 0,1 mm (Anonim, 2011).

2.4 Pengenalan Media

      Pembiakan adalah proses perbanyakan organisme melalui penyediaan kondisi lingkungan yang sesuai. Mikroorganisme yang sedang tumbuh membuat replika dirinya, membutuhkan adanya elemen-elemen dalam komposisi kimia mereka. Nutrisi harus menyediakan elemen ini dalam bentuk yang mudah di metabolisme (Jawetz, 2001).

      Demikian pula dengan media sebagai tempat berkembang biakan bekteri, karena media merupakan salah satu bahan yang terdiri dari campuran nutrisi zat makanan yang dipakai untuk menumbuhkan mikroba (Anonim, 2007).

      Kebanyakan berat kering dari mikroorganisme adalah bahan-bahan organik yang mengandung elemen-elemen karbon, hidrogen, nitrogen, oksigen, phospor dan belerang (Jawetz, 2001).

      disamping itu, ion-ion anorganik seperti potasium, sodium, besi, magnesium, kalsium dan klorida dibutuhkan untuk memfasilitasi katalis enzim dan mempertahankan Gradien kimia yang melalui membran sel (Jawetz, 2001).

      Oleh karena itu adapun syarat-syarat untuk media yang baik adalah media harus mengandung semua nutrisi yang mudah digunakan bakteri, Media tidak mengandung zat-zat penghambat serta media harus steril (Anonim, 2007).

        Klasifikasi media berasarkan fungsinya yaitu;

1)    Enriched media, adalah sejumlah media umum yang kemudian ditambahkan dengan darah, serum, ekstrak tumbuh-tumbuhan atau kaldu yang mampu memacu pertumbuhan bakteri patogen.

2)    Media selektif, yaitu media yang menggunakan bahan-bahan kimia yang bersifat memacu pertumbuhan bakteri yang diinginkan.

3)    Media diferensial yaitu media yang ditambahkan zat-zat kimia tertentu yang menyebabkan suatu mikroorganisme membentuk perubahan tertentu, sehingga dapat membedakan tipe mikrooraganisme.

4)    Media Penguji, yaitu media dengan susunan tertentu yang digunakan untuk pengujian antibiotika, asam amino dan vitamin.

5)    Media Khusus yaitu media untuk menentukan tipe pertumbuhan mikroorganisme dan kemampuannya untuk mengadakam perubahan-perubahan tertentu.

6)    Media untuk bakteri Anaerob yaitu beberapa bahan kimia dapat ditambahkan untuk menguji kandungan O² dengan pengikatan kimiawi (Anonim, 2007).

  Berbagai jenis ose yang dikenal serta penggunaannya disesuaikan dengan mikroorganisme yang akan diteliti, baik dalam hal pemindahan maupun pemilihan dari suatu koloni (Hadioetomo, 1993).

  Teknik plating dan ose merupakan satu kesatuan sehingga keduanya memiliki keterkaitan satu sama lainnya (karena teknik plating dilakukan dengan menggunakan ose) (Hadioetomo, 1993).

2.5 Sediaan (Smear = Preparat)

        a. Pengertian

      Sediaan, yaitu sampel/ kultur bakteriyang diletakkan atau dipulaskan pada permukaan objek gelas/ slide, yang dapat langsung dilihat dengan mikroskop atau harus dicat dahulu (Soemarno, 2000).

        b. Jenis-ienis sediaan dan pembuatannya.

       Ada 2 jenis sediaan, yaitu sediaan hidup dan sediaan mati. Sediaan hidup ada yang dicat dan tidak dicat, sedangkan sediaan matipada umumnya harus dicat (Soemarno, 2000).

        1. Sediaan hidup tidak dicat:

       Di dalam sediaan ini mikroorganisme yang ada masih hidup dan apabila bergerak dapat kelihatan bergerak. Sediaan hidup dapat dibuat dengan 3 cara:

a. Tetesan tegak

-          Disiapkan objek glass/ slide yang bersih dan bebas lemak

-          Ose disterilkan dengan memijarkan menggunakan lampu spritus, ditunggu sampai kira-kira dingin.

-          Dengan ose yang sudah dingin diambil sampel/ kultur bakteri, 1 ose penuh (diameter 3 mm). Diletakkan ditengah-tengah objek glass tersebut diatas.

-          Ose disteril lagi, kemudian ditaruh ditempatnya.

-          Sediaan siap dilihat dengan mikroskop menggunakan perbesaran 10 x (lensa okuler) dan 40 x (lensa objektif).

Jika telah selesai dilihat, sediaan dimasukkan kedalam cairan desinfektan (Soemarno, 2000).

b. Tetesan tegak dengan kaca penutup

        Cara pembuatannya sama dengan tetesan tegak, hanya sebelum dilihat dengan mikroskop, ditutup dahulu dengan deckglass / kaca penutup, kemudian sedikit ditekan (Soemarno, 2000).

c. Tetes gantung

-          Ose dipijarkan, tunggu sampai dingin.

-          Dengan ose diambil 1 ose penuh sampel kuftur bakteri cair.

-          Letakkan ditengah-tengah deck glass/ cover glass yartg bersih bebas lemak.

-          Ose diipijarkan lagi dan diletakkan ditempatnya.

-          Objek glass cekung yang bersih, tepi cekungan diolesi vaseline, ditutupkan deckg lass yang sudah ada tetesan sampel/ kultur bakteri cair, sehingga tetesan itu terletrak di tengah-tengah cekungan.

-          Obiek glass sedikit ditekan, kemudian dibalik dengan cepat. Tetesan menggantung ditengah-tengah deckglass diatas cekungan deck glass.

-          Sediaan siap dilihat dengan mikroskop menggunakan objektif 10 x dahulu kemudian 40 x (Soemarno, 2000).

      2. Sediaan hidup dengan dicat

      Biasanya untuk pemeriksaan protozoa (amoeba, flagellata, cilliata), organisme didalam sediaan ini masih hidup dan berwama seluruh tubuhnya atau sebagian atau bagian-bagian tubuhnya (Soemarno, 2000).

      3. Sediaan mati dicat

      Sediaan ini dibuat dari bahan cair/ padat yang lebih dahulu dibuat suspensi dengan air garam fisiologis (NaCl 0,85 - 0,9 %). Untuk dapat dilihat dengan mikroskop, sediaan ini harus dicat (Soemarno, 2000).

2.6 FIKSATIF

      Adalah suatu cara yang dilakukan untuk meletakkan sampel pada kaca objek, sehingga tidak mudah lepas pada waktu dicuci apabila sediaan dicat (Soemarno, 2000).

Fungsi fiksatif:

-          Melekatkan sampel (bakteri atau sel) pada kaca objek dalam benfuk yang tetap, tidak berubah seperti aslinya.

-          Mengawetkan sediaan.

-          Mematikan organisme yang ada didalam sampel.

-          Memudahkan bakteri/ sel menyerap warna.

Metode fiksatif:

a)    Dengan api bunsen/ spritus:

Sediaan yang sudah kering dilewatkan perlahan-lahan pada nyala api spritus 3 kali berturut-turut.

b)    Dengan basa lemah:

Methyl alkohol, acetyl alkohol, alkohol absolut, ether, formalin, aceton. Caranya: sediaan yang sudah kering digenangi dengan salah satu basa lemah tersebut diatas selama 3 menit.

c)     Asam:

Asam kromat (chromat) 1%, asam pikrat, asam cuka, caranya seperti no. 2

d)    Garam:

Garam bichromat, sublimat, dsb. Caranya seperti no.2. Pemilihan metode fiksatif dan cat yang tepat, akan menghasilkan pengecatan yang baik dan benar (Soemarno, 2000).

BAB III

METODE KERJA

3.1 Alat

-          Mikroskop

-          Objek glass

-          Cover glass

-          Cawan petri

-          Pipet tetes

-          Botol kaca

-          Lampu Bunsen

3.2 Bahan

-          NaCl steril

-          Suspensi Bakteri Gram Positif (+)

-          Tissue

-          Masker

-          Handscoon

3.3 Cara Kerja

  Tetesan tegak

-          Disiapkan objek glass/ slide yang bersih dan bebas lemak

-          Diberi 1 tetes NaCl steril ditengah-tengah object glass

-          Disterilkan ose dengan memijarkan menggunakan lampu spritus, ditunggu sampai kira-kira dingin.

-          Diambil sampel/ kultur bakteri dengan ose yang sudah dingin, 1 ose penuh (diameter 3 mm). Mengambil bakteri harus membelakangi lampu bunsen.

-          Diletakkan ditengah-tengah objek glass tersebut .

-          Dihomogenkan bersama dengan NaCl steril menggunakan ose

-          Disterilkan lagi jarum ose, kemudian ditaruh ditempatnya.

-          Dilihat sediaan dengan mikroskop menggunakan perbesaran 10 x (lensa okuler) dan 40 x (lensa objektif).

-          Dimasukkan sediaan  kedalam cairan desinfektan jika telah selesai dilihat.

3.3 Interprestasi Hasil

  Gambar 3.1 Bakteri hidup bergerak aktif

 Gambar 3.2 Bakteri tidak hidup atau mati

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil

Gambar 4.1 Cawan Petri berisi Blood Agar dan suspensi bakteri

       

Gambar 4.2 Gerak Bakteri Bakteri bergerak aktif dengan perbesaran 40x

Gambar 4.3 Bakteri Tidak Bergerak Karena Bakteri telah matiperbesaran 40x

 

4.2. Pembahasan

       Praktikum kali ini digunakan untuk mengamati gerak pada bakteri. Dalam praktikum ini digunakan metode “tetesan tegak”. Metode ini bertujuan untuk mengamati gerak bakteri secara bebas.  

      Sediaan hidup tegak tanpa atau dengan kaca tutup digunakan untuk melihat gerak bakteri, sedimen urin, agglutinate, bile solubility test, dsb. Sediaan hidup tetesan tegak dengan kaca tutup lebih baik daripada yang tanpa tutup, karena bahan yang diperiksa tidak lekas kering, tidak terpengaruh aliran udara luar, mempunyai ketebalan yang sama, tidak mengotori objektif (Anonim, 2011)

      Dalam praktikum ini, pada pemindahan bakteri ke kaca preparat harus selalu dekat dengan lampu bunsen untuk menghindari bakteri yang keluar dari wadah, dan tidak terhirup oleh praktikan. Pemijaran atau fiksasi jarum ose harus selalu dilakukan agar pada saat pembuatan media sediaan bakteri yang diinginkan tidak terkontaminasi dengan bakteri lain dari luar (Anonim, 2011)

      Sediaan bakteri hidup dapat dilihat apabila dilakukan kultur atau pembuatan sediaan dilakukan dengan benar dan menghasilkan mikroorganisme bakteri tetap hidup ketika diperiksa, apabila kultur atau pembuatan sediaan bakteri salah maka bakteri akan mati ketika diperiksa (Anonim, 2009).

      Penanaman bakteri atau biasa disebut juga inokulasi. Inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat  tinggi.  Untuk melakukan penanaman bakteri (inokulasi) terlebih dahulu diusakan agar semua alat yang ada dalam hubungannya dengan medium agar tetap steril, hal ini agar menghindari terjadinya kontaminasi (Jawetz, 1982)

      Ada beberapa tahap yang harus dilakukan sebelum melakukan teknik penanaman bakteri (inokulasi) yaitu :

        1. Menyiapkan ruangan

      Ruang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar tidak terjadi kesalahan dalam pengamatan atau percobaaan. Dalam laboratorium pembuataan serum vaksin dan sebagainya. Inokulasi dapat dilakukan dalam sebuah kotak kaca (encast) udara yang lewat dalam kotak tersebut dilewatkan saringan melalui suatu jalan agar tekena sinar ultraviolet.

        2. Pemindahan dengan dengan pipet

      Cara ini dilakukan dalam penyelidikan air minum atau pada penyelidikan untuk diambil 1 ml contoh yang akan diencerkan oleh air sebanyak 99 ml murni.

        3. Pemindahan dengan kawat inokulasi

      Ujung kawat inokulasi sebaliknya dari platina atau nikel. Ujungnya boleh lurus juga boleh berupa kolongan yang diametrnya 1-3 mm. Dalam melakukan penanaman bakteri kawat ini terlebih dahulu dipijarkan sedangkan sisanya tungkai cukup dilewatkan nyala api saja setelah dingin kembali kawat itu disentuhkan lagi dalam nyala (Jawetz, 1982)

      Dalam praktikum ini, sel bakteri yang diletakkan diatas NaCl steril di atas preparat sediaan “tetesan tegak” akan membentuk sistem koloid. Partikel NaCl kemudian bertumbukan dengan molekul koloid, yang gerakannya adalah gerakan lenting sempurna. Tetapi karena ukuran bakteri lebih besar dari molekul NaCl, maka gerakannya lambat (Anonim, 2011).

      Gerak bakteri pada bakteri yang bersifat motil diakibatkan oleh adanya struktur atau organ sel bakteri yang berbentuk benang yang disebut flagella. Karena flagella pada bakteri berfungsi untuk bergerak. Flagella berbentuk panjang dan ramping (Anonim, 2011).

      Pada umumnya memiliki panjang sekitar 12 sampai 30 nm. Flagella dapat dilihat pada mikroskop cahaya jika ditambah dengan substansi khusus yaitu mordan yang merupakan substansi yang dapat mempertajam pengamatan yang berfungsi untuk membesarkan garis lengan flagella, setelah itu pada sediaan digunakan suatu zat pewarna sehingga flagella dapat terlihat (Anonim, 2011).

      Banyak spesies bakteri yang bergerak menggunakan flagel. Hampir semua bakteri yang berbentuk lengkung dan sebagian yang berbentuk batang ditemukan adanya flagel. Sedangkan bakteri kokus jarang sekali memiliki flagel. Ukuran flagel bakteri sangat kecil, tebalnya 0,02 – 0,1 mikro, dan panjangnya melebihi panjang sel bakteri (Anonim, 2007).

      Dari hasil pengamatan dalam praktikum ini, dari suspensi bakteri yang diamati memiliki kemampuan bergerak. Dari pengamatan bentuk bakteri diketahui bahwa bakteri yang diamati adalah berbentuk coccus. Dari hasil pengamatan tersebut, diketahui bahwa bakteri yang diamati bergerak bebas. Namun demikian, dalam praktikum ini tidak dilakukan pengamatan alat gerak bakteri. Kemampuan suatu organisme untuk bergerak sendiri disebut motilitas (daya gerak). Hampir semua sel bakteri spiral dan sebagian dari sel bakteri basil bersifat motil, sedangkan bakteri yang berbentuk kokus bersifat tidak bergerak (immotil) (Anonim, 2007).

      Pergerakan bakteri yang diamati berbeda dengan ‘gerak’ pada bakteri yang bersifat immotil/tidak bergerak. Pergerakan pada bakteri yang bersifat motil menunjukkan pergerakan yang lebih kompleks, menuju ke arah tertentu (bukan gerak brown) sedangkan ‘gerak’ pada bakteri yang bersifat tidak motil adalah gerak maju mundur secara zig-zag yang disebut dengan gerak brown (Anonim, 2007).

      Gerak brown terjadi karena adanya benturan dengan molekul air yang bergerak dengan arah zig-zag, gerakan ini disebabkan adanya tumbukan antara molekul-molekul pelarut dengan molekul koloid. Tumbukan yang terjadi adalah lenting sempurna, artinya tenaga kinetik molekul pelarut dan partikel koloid sama tapi karena partikel koloid lebih besar maka gerakannya lebih lambat jika dibandingkan dengan molekul pelarut (Anonim, 2007).

      Pada praktikum kali ini, bakteri yang dilihat dengan mikroskop adalah bakteri yang berbentuk coccus sehingga gerak bakteri yang dilihat bergerak zig-zag sehingga disebut gerak brown, karena bakteri coccus memiliki flagel yang sangat kecil (Anonim, 2007).

BAB V

 

 

DAFTAR PUSTAKA

Anonim, 2007. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi. Mataram: Universitas Mataram Press.

Anonim, 2011. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi. Samarinda: STIKES Wiyata Husada Samarinda.

Anonim, 2009. http://id.wikipedia.org/wiki/Mikroskop_elektronTeknik_ pembuatan_preparat_yang_digunakan_pada_mikroskop_elektron. Diakses tanggal 15 Juni 2011

Dwidjoseputro, D. 1989. Dasar-Dasar  Mikrobiologi. Malang: Djambatan.

Hadiotomo, Ratna Siri., 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Jakarta: Gramedia.

Jawetz E., Melnick J.L., Adelberg E.A., 1982. Mikrobiologi untuk profesi kesehatan. Jakarta: EGC Press.

Jawetz E., Melnick J.L., Alderberg E.A., 2001. Mikrobiologi kedokteran. Surabaya: Airlangga University Press.

Soemarno. 2000. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Klinik. Yogyakarta:  Akademi Analis Kesehatan Yogyakarta DEPKES RI.